一、背景原理分析:
1.生物分子表面大都含或強(qiáng)或弱的疏水區(qū)域,在不同環(huán)境下,與各種疏水介質(zhì)產(chǎn)生不同強(qiáng)弱和結(jié)合。
2.高離子強(qiáng)度可加強(qiáng)疏水性。和離子交換剛剛相反,高鹽吸附,低鹽洗脫。經(jīng)洗脫樣品又可直接或稍加稀釋后上。
3.其它層析柱,做為連接下游和層析步驟的橋梁。并可*取代傳統(tǒng)的鹽析沉淀技術(shù),更符合工業(yè)生產(chǎn)要求。
4.比反相層析介質(zhì)的配體密度低許多,無需有機(jī)溶液劑洗脫,保存生物活性。配體種類繁多,提供寬廣的選擇性。
二、疏水層析也稱疏水作用層析(hydrophobicinteractionchromatographyHIC)。蛋白質(zhì)表面一般有疏水與親水基團(tuán),疏水層析是利用蛋白質(zhì)表面某一部分具有疏水性,與帶有疏水性的載體在高鹽濃度時(shí)結(jié)合。在洗脫時(shí),將鹽濃度逐漸降低,因其疏水性不同而逐個(gè)地先后被洗脫而純化,可用于分離其它方法不易純化的蛋白質(zhì)。
三、HIC配基基團(tuán)一般為丁基、苯基、辛基,其碳鏈分別為C4,C6(苯環(huán))和C8。一般來說,碳鏈越長(zhǎng),表面疏水性越高。影響疏水作用的因素包括:鹽濃度,溫度,pH,表面活化劑和有機(jī)溶劑。疏水層析的應(yīng)用與離子交換層析的應(yīng)用剛好互補(bǔ),因此,可以用于分離離子交換層析很難或不能分離的物質(zhì)。
四、優(yōu)勢(shì)特點(diǎn):
可提供從分析到全生產(chǎn)規(guī)模的所有包裝尺寸;
化學(xué)穩(wěn)定的瓊脂糖基質(zhì);
可在高和低配體密度、交替交聯(lián)水平和不同珠粒尺寸下生產(chǎn),以優(yōu)化分離介質(zhì);
所有版本都可以按比例放大并生產(chǎn),以供GMP使用。